【摘　要】目的　研究不同含鋅飼料對(duì)生長(zhǎng)大鼠學(xué)習(xí)記憶的影響及與其腦中生長(zhǎng)抑素、鋅和鈣含量的關(guān)系, 以確定維持大鼠*佳學(xué)習(xí)記憶狀態(tài)的補(bǔ)鋅范圍。方法　以含鋅量為20、50、100、200、400和800m gökg的飼料飼喂88g左右的W ista r大鼠, 雌雄各半; 以避暗法測(cè)試各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)習(xí)記憶能力, 并以放免法測(cè)定了腦組織生長(zhǎng)抑素; 以原子吸收光譜法測(cè)定腦組織鋅和鈣含量。結(jié)果100m gökg和200m gökg的飼料鋅含量, 使大鼠學(xué)習(xí)記憶功能*好, 而較低和較高的飼料鋅水平對(duì)學(xué)習(xí)記憶功能均有不同程度的不利影響; 同時(shí)較低和較高的飼料鋅水平使下丘腦、海馬和大腦皮層生長(zhǎng)抑素水平都有不同程度的降低; 另外, 較低的飼料鋅水平可使血液鋅、海馬、大腦皮層和下丘腦鋅水平一致性地降低, 同時(shí)使大腦皮層鈣含量降低。結(jié)論　100～200m gökg飼料鋅含量, 對(duì)維持大鼠學(xué)習(xí)記憶功能是*適的補(bǔ)鋅范圍, 這與大鼠腦組織較高的生長(zhǎng)抑素、鋅和鈣水平一致。

關(guān)鍵詞: 　鋅; 　學(xué)習(xí); 　生長(zhǎng)抑素; 　鈣　　我們已報(bào)道的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明, 飼喂缺鋅飼料可降低大鼠的學(xué)習(xí)記憶功能; 另有實(shí)驗(yàn)表明, 在每公斤飼料含鋅1000m g的高鋅條件下, 幼鼠學(xué)習(xí)記憶功能及其海馬結(jié)構(gòu)受損。然而, 尚未見(jiàn)從有助于學(xué)習(xí)記憶的角度, 闡述*適補(bǔ)鋅量或補(bǔ)鋅范圍的研究報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)的目的, 主要是從學(xué)習(xí)記憶的角度, 闡述*適的補(bǔ)鋅范圍, 并探討補(bǔ)鋅量與腦中生長(zhǎng)抑素、鋅和鈣的關(guān)系。

1　材　料　與　方　法

. 1　實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組與飼養(yǎng)

　　采用88g左右的W ista r大鼠72只, 雌雄各半, 隨機(jī)均分為6組, 每組12只, 分別飼喂含鋅20、50、100、200、400和800m gökg的飼料, 各組均為自由攝食, 自由飲水。飼養(yǎng)期間, 嚴(yán)格防止金屬元素污染, 所用不銹鋼籠具沖洗, 飼料和飲水玻璃罐經(jīng)去離子水浸泡沖洗, 飲水為去離子水, 整個(gè)實(shí)驗(yàn)期30d。

1. 2　實(shí)驗(yàn)飼料

　基礎(chǔ)飼料的配制參照我們?cè)瓉?lái)的方法略有改進(jìn), 大豆蛋白經(jīng)0. 5% ED TA 純水去掉一部分鋅,其組成為(gö10kg): 蔗糖6 500,純化大豆蛋白1900,植物油1 000,混合鹽(584 g混合鹽中含:CaH PO4 274g, CaCO3 98g,N a2HPO4 69g,N aC l38g, KC l69g,M gSO4 29g, K IO3 0. 1 g, CuSO4·5H2O0. 1 g,M nSO4 2. 0 g, F eSO4·7H2O2. 5 g),復(fù)合維生素(16g復(fù)合維生素中含:B1 24m g,B2 60m g,B6 30m g, 泛酸鈣200m g, 肌醇1000m g, 煙酸400m g, 生物素20m g, 葉酸20m g,B120. 2m g,V K100m g, 膽堿10 000m g,V E600m g,V A20萬(wàn)IU ,V D4萬(wàn)IU)。配成的飼料經(jīng)原子吸收光度計(jì)檢測(cè),含鋅量為20. 0m gökg, 稍高于有關(guān)資料報(bào)道的大鼠對(duì) 鋅的*低需要量(12. 0m gökg), 但未達(dá)到A IN276飼料的推薦量(30. 0m gökg), 其他各組的飼料以硫酸鋅的形式添加鋅到基礎(chǔ)飼料中, 以得到各組所需的鋅水平。

1. 3　檢測(cè)指標(biāo)

1. 3. 1　生長(zhǎng)狀況: 　實(shí)驗(yàn)開(kāi)始時(shí)**次稱重, 以后每7d的同一時(shí)間稱重一次, 以檢測(cè)各組大鼠的生長(zhǎng)情況。

1. 3. 2　學(xué)習(xí)記憶功能的測(cè)定: 　測(cè)試裝置為避暗箱, 在飼養(yǎng)實(shí)驗(yàn)到22日齡時(shí), 進(jìn)行“訓(xùn)練”, 將大鼠放入明室, 記錄大鼠四肢全部進(jìn)入暗室時(shí)在明室停留的時(shí)間稱為進(jìn)洞潛伏期, 當(dāng)大鼠進(jìn)入暗室, 即刻通電(電壓50V), 電擊的大鼠逃回明室, 經(jīng)30s后將大鼠取出,“訓(xùn)練”后的第7d即進(jìn)行“考核”, 再將大鼠放入明室, 并觀察進(jìn)洞潛伏期。學(xué)習(xí)記憶能力, 主要根據(jù)“考核”與“訓(xùn)練”的潛伏期的變化, 我們?cè)?ldquo;考核”和“訓(xùn)練”時(shí)均觀察5m in, 在“考核”時(shí), 5 m in內(nèi)不進(jìn)入暗室的大鼠為“記憶良好”,“考核”時(shí)進(jìn)洞潛伏期減去“訓(xùn)練”時(shí)進(jìn)洞潛伏期的差值, 大于30s者為“記憶中等”, 差值小于30s者為“記憶差”。1. 3. 3　腦區(qū)生長(zhǎng)抑素含量測(cè)定: 　每組各抽取6只大鼠(雌雄比例相同)的端腦, 在沸生理鹽水中煮5m in, 以滅活酶, 保持神經(jīng)肽的穩(wěn)定, 然后分出皮層、海馬和下丘腦, 分別稱重后, 置于玻璃勻漿器內(nèi), 加入1m o löLH C l1m l充分勻漿后倒入塑料指形管中, 在室溫中放置100m in, 使生物活性肽充分溶解在酸中, 然后加入1m o löLN aO H1m l中和酸4 000röm in離心10m in, 取上清, 按**軍醫(yī)大學(xué)神經(jīng)生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室提供的藥盒說(shuō)明書(shū)測(cè)定生長(zhǎng)抑素含量。

1. 3. 4　外周血漿鋅含量和腦區(qū)鋅和鈣含量測(cè)定: 　收集血漿樣品直接稀釋, 以原子吸收光度法測(cè)定, 另外每組各抽取6只大鼠(雌雄比例相同)的端腦, 分離出皮層、海馬和下丘腦, 分別稱重, 然后以混合酸(硝酸: 高氯酸= 5∶1)濕化消化, 以原子吸收光譜法測(cè)定其中的鋅和鈣的含量。

2　結(jié)　果

2. 1　各組大鼠的生長(zhǎng)狀況

　　各組大鼠各階段的體重見(jiàn)表1,經(jīng)方差分析和多重比較, 只在實(shí)驗(yàn)的14d時(shí), 與20m gökg組比較, 400 m gökg組開(kāi)始出現(xiàn)顯著性差異, 與其他組在各階段均差異不顯著。800m gökg組在前2w k內(nèi)有增重降低的趨勢(shì), 但隨后則能趕上增重速度。2. 2　各組大鼠的學(xué)習(xí)記憶功能

　　根據(jù)避暗反應(yīng), 測(cè)得各組大鼠的學(xué)習(xí)記憶功能的結(jié)果見(jiàn)表2。從結(jié)果看出, 添加100m gökg和200m gökg鋅的兩個(gè)組學(xué)習(xí)記憶功能*好、經(jīng)V2檢驗(yàn),它們與20m gökg組, 差異顯著(P< 0. 05)。50m gökg、400m gökg和800m gökg等組與*佳的兩組比較, 也有一定的差距。說(shuō)明在50m gökg以下和400m gökg以上的飼料鋅濃度時(shí)大鼠的學(xué)習(xí)記憶功能不理想。