亞急性衰老動物模型制作方法

基本原理：在一定時間內(nèi)連續(xù)給動物注射D-半乳糖，使機體細胞內(nèi)半乳糖濃度增高，在醛糖還原酶催化下，還原為半乳糖醇，這種物質(zhì)不能被細胞進一步代謝而堆積在細胞內(nèi)，影響正常滲透壓，導(dǎo)致細胞腫脹，功能障礙、代謝紊亂，破壞并消耗機體抗氧化防御系統(tǒng)，使自由基積聚。同時在半乳糖還原成半乳糖醇的過程中又產(chǎn)生（O2-），這樣使細胞膜脂質(zhì)受損，過氧化脂質(zhì)、脂褐質(zhì)等增高，出現(xiàn)衰老。
操作步驟：
取健康雌性小鼠，普通飼料常規(guī)喂養(yǎng)。模型組小鼠每天頸背部皮下注射D-半乳糖（0.25ml/10g），連續(xù)6～8周后，小鼠行動遲緩，毛色灰暗，形體瘦弱，呈現(xiàn)明顯的衰老體征，即造成亞急性衰老模型?？瞻讓φ战M同樣每天皮下注射生理鹽水（0.25ml/10g）。末次給藥和D-半乳糖2h后，進行學(xué)習(xí)記憶訓(xùn)練實驗（避暗實驗），次日測定記憶成績，然后眼眶取血后處死。取小鼠胸腺、脾、腦、肝和心臟組織，測定各項衰老指標。
避暗實驗（step through test）：反射箱分單獨5個箱，每個箱大小為36cm×12cm×12cm ，分明暗兩室。明室由透明有機玻璃構(gòu)成，暗室底部安銅柵，通以36V電流，明暗兩室之間有一直徑為3cm洞口，反射箱通過連線與微機連接，由微機控制記錄動物從明室通過洞口進入暗室的潛伏期。實驗時將小鼠面部背向洞口放入明室，同時開始計時,動物穿過洞口進入暗室受到電擊，計時自動停止。取出小鼠，記錄小鼠從明室入暗室的潛伏期和5min內(nèi)的電擊次數(shù)，此為訓(xùn)練成績。24h后再測為測試成績。
測定指標：
1、體重
2、臟器指數(shù)（胸腺、脾、肝和腦的臟器指數(shù)）
臟器指數(shù)=臟器重量/體重×100%
3、抗氧化指標
血液：MDA、SOD和MAO
肝和腦：MDA
腦：MAO
注意事項：
1、選擇雌性小鼠，因?qū)嶒炛芷陂L，雄性鼠長期群居，好咬斗易造成受傷影響實驗結(jié)果。
2、注射給藥必須無菌操作，鼠籠墊料與飲水壺定時換洗，保持清潔，因給藥時間較長，機體逐漸老化，功能狀態(tài)漸差。